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一、题文

金圆着天热况热金圆着天热况热叶绿体DNA（cpDNA）大多为环状双链，其基因组序列高度保守，目前已在分子标记、核质互作、叶绿体基因工程等方面开展了广泛研究。下列为提取cpDNA的相关步骤，其中SDS能瓦解生物膜，苯酚使蛋白质变性析出，氯仿与苯酚互溶，易于除去苯酚。 金圆着天热况热（1）叶绿体的分离 金圆着天热况热①匀浆使细胞破碎：将叶片于4℃冰箱黑暗饥饿处理12～24h后，剪成1cm长度，放入匀浆机，倒入缓冲液，先低速匀浆2次，再高速匀浆3次，每次5～10s.匀浆前黑暗饥饿处理的目的是 ______ ，有利于cpDNA的提取。 金圆着天热况热②离心得到叶绿体粗提物：将匀浆液过滤后离心，弃沉淀以去除细胞残骸；将得到的上清液再次离心，弃上清，即得叶绿体粗提物，第二次离心的速度比第一次 ______ 。整个过程中线粒体分布在 ______ 中，从而避免了线粒体DNA对cpDNA的污染。 金圆着天热况热（2）去除核DNA：向叶绿体粗提物中加入 ______ 、缓冲液，37℃静置15min后，离心取沉淀，从而去除吸附在叶绿体外膜上的核DNA. 金圆着天热况热（3）叶绿体的裂解和cpDNA的粗提：将纯化的叶绿体加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，55℃水浴3h，使叶绿体裂解，释放出cpDNA，离心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿，离心后的液体包括上层水相、中层变性蛋白和下层有机溶剂，cpDNA分布于 ______ 中，小心用移液枪吸取该层液体。 金圆着天热况热（4）沉淀cpDNA：向粗提溶液中加入3mol•L金圆着天热况热-1金圆着天热况热醋酸钠及预冷的 ______ ，离心取沉淀物。 金圆着天热况热（5）电泳检测cpDNA：图1、2是某品种茶树用上述方法提取到的cpDNA凝胶电泳结果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2组无条带，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作过程中叶绿体裂解时间过长，导致 ______ 。 金圆着天热况热（6）叶绿体基因的遗传方式 ______ （填“遵循”或“不遵循”）孟德尔遗传定律，不会随 ______ 传给后代，从而保持了母本的遗传特性，并且避免转基因植物对其近缘植物的基因污染。金圆着天热况热

二、解答

装你得局使叶绿体中的淀粉消耗掉 高 上清液 DNA酶 上层水相 95%酒精 cpDNA片段断裂或降解，所提取的cpDNA含量少 不遵循 花粉装你得局

三、分析

率少命白江备价十达适些全制人流解：（1）①匀浆使细胞破碎：将叶片于4℃冰箱黑暗饥饿处理12～24h后，剪成1cm长度，放入匀浆机，倒入缓冲液，先低速匀浆2次，再高速匀浆3次，每次5～10s。匀浆前黑暗饥饿处理的目的是使叶绿体中的淀粉消耗掉，有利于cpDNA的提取。率少命白江备价十达适些全制人流②离心得到叶绿体粗提物：将匀浆液过滤后离心，弃沉淀以去除细胞残骸；将得到的上清液再次离心，弃上清液，即得叶绿体粗提物，第二次离心的速度比第一次高。整个过程中线粒体分布在上清液中，从而避免了线粒体DNA对cpDNA的污染。率少命白江备价十达适些全制人流（2）向叶绿体粗提物中加入DNA酶可水解DNA，从而去除吸附在叶绿体外膜上的核DNA。率少命白江备价十达适些全制人流（3）由于DNA可以溶解在水里，所以在上清液中加入苯酚和氯仿，离心后的液体包括上层水相、中层变性蛋白和下层有机溶剂，cpDNA分布于上层水相中，小心用移液枪吸取该层液体。率少命白江备价十达适些全制人流（4）DNA不溶于酒精，向粗提溶液中加入3mol•L^{率少命白江备价十达适些全制人流-1}率少命白江备价十达适些全制人流醋酸钠及预冷的95%酒精，使DNA沉淀，所以离心取沉淀物获取cpDNA。率少命白江备价十达适些全制人流（5）2组无条带，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作过程中叶绿体裂解时间过长，导致cpDNA片段断裂或降解，所提取的cpDNA含量少。率少命白江备价十达适些全制人流（6）有性生殖生物的细胞核基因的遗传方式遵循孟德尔遗传定律，叶绿体基因的遗传方式不遵循孟德尔遗传定律，不会随花粉传给后代，从而保持了母本的遗传特性，并且避免转基因植物对其近缘植物的基因污染。率少命白江备价十达适些全制人流故答案为：率少命白江备价十达适些全制人流（1）使叶绿体中的淀粉消耗掉高上清液率少命白江备价十达适些全制人流（2）DNA酶率少命白江备价十达适些全制人流（3）上层水相率少命白江备价十达适些全制人流（4）95%酒精率少命白江备价十达适些全制人流（5）cpDNA片段断裂或降解，所提取的cpDNA含量少率少命白江备价十达适些全制人流（6）不遵循花粉率少命白江备价十达适些全制人流1、提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。率少命白江备价十达适些全制人流2、DNA的溶解性率少命白江备价十达适些全制人流（1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。率少命白江备价十达适些全制人流（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。率少命白江备价十达适些全制人流3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。率少命白江备价十达适些全制人流4、DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。率少命白江备价十达适些全制人流本题考查了DNA的粗提取和鉴定的有关知识，要求考生能够掌握实验的原理、方法和注意点，能够通过题干信息确定实验中各步骤的目的，明确DNA鉴定需要水浴加热，并能够结合题干要求答题。率少命白江备价十达适些全制人流

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